键的起点,确认在他们的特定EGFR突变细胞系中,PKCδ的磷酸化水平确实在用药后异常升高,且时间点与预测吻合。
这是一切的基础,只有完成了靶点确认,他们才能进行下一步实验。
很快,宋朝明安排好实验分工,众人一哄而散,穿上实验服进入实验室,虽然心中依旧有些迟疑,但他们也迫不及待的想看到最后的验证结果。
可惜生物实验与其他实验还有一些不同,它需要时间的沉淀,无法速成。
实验紧张而有序地展开,培养箱日夜运行,实验室的灯常常亮到深夜。
直到三天后,Western Blot结果才出来,
当那张暗房里显影的胶片被拿出来时,负责的实验员几乎是小跑着拿去给宋朝明。
结果清晰无比,在用药后1小时和6小时,PKCδ的磷酸化条带果然比对照组明显更浓!模型的第一步预测被完美证实!
实验室里响起一阵小小的欢呼,所有人看向陈辉的眼神都变了,有因为之前怀疑的愧疚,也有因为陈辉惊人实力而产生的狂热崇拜。
“陈师弟牛逼!”
不知道哪位师弟忽然激动的大喊了一声。
“陈师弟牛逼!”
很快,这样的欢呼就充满了实验室。
宋朝明脸上也露出了欣慰的笑容,他这所重点实验室,已经很久没有经历过如此热烈的欢呼了。
“好了,这只是第1步,最关键的还在后面呢。”
等了几分钟,等到大家将兴奋的情绪宣泄以后,宋朝明才再次开口说道。
接下来他们需要进行功能获得/丧失实验,首先,他们需要设计并合成针对PKCδ基因的siRNA,转染进癌细胞,特异性沉默PKCδ的表达。
使用一种已知的、较为特异的PKCδ抑制剂比如Rottlerin或其类似物,在不同浓度下处理细胞。
使用CCK-8或MTT等assays,分别检测在仅用靶向药、仅抑制PKCδ、以及两者联用的情况下,癌细胞的增殖活力变化。
根据陈辉的模型预测,联用组应表现出显著的协同抑制效应。
接下来就需要进行长期观察,观察在长期作用下,癌细胞形成集落的能力是否被联用方案彻底摧毁。
在施加上述处理后,再次利用Western Blot或磷酸化抗体芯片,检测陈辉预测的通路下游关键蛋白CRAF, MEK
…。。本站若有图片广告属于第三方接入,非本站所为,广告内容与本站无关,不代表本站立场,请谨慎阅读。
Copyright © 2020 暮色书屋 All Rights Reserved.kk